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分子互作實驗IP/CO-IP免疫共沉淀

更新時間:2025-07-10點擊次數:13

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一、技術簡介

IP(免疫沉淀,Immunoprecipitation)和Co-IP(免疫共沉淀,Co-Immunoprecipitation)是研究蛋白質功能及相互作用的核心技術,廣泛應用于分子生物學和細胞生物學領域。


二、技術原理

IP通過特異性抗體與目標蛋白結合,利用抗體將靶標蛋白(即抗原)分離出來,從而檢測某一種蛋白的表達情況;而CO-IP是在IP基礎上,驗證蛋白質間的相互作用。通過捕獲一個蛋白(誘餌蛋白),檢測與其結合的互作蛋白(靶蛋白),從而特異性富集所研究的目的蛋白,進而研究復合物中與已知蛋白存在相互作用的蛋白。

IPCO-IP.png

三、應用場景

1.IP:富集低豐度蛋白用于質譜鑒定(IP-MS)、驗證抗體特異性。

2.Co-IP:研究轉錄因子復合物、激酶-底物相互作用及驗證已知互作或發(fā)現新互作伙伴(如信號通路復合物)。


四、技術優(yōu)勢

1.IP:具有高特異性,依賴抗體-抗原的專一性結合。

2.靈活性:支持物可選磁珠(操作簡便、自動化兼容)或瓊脂糖(高結合容量)。

3.Co-IP:體內真實性:研究的是體內自然狀態(tài)下的蛋白質互作,可反應比較真實的蛋白互作。


五、樣本類型

新鮮細胞(貼壁細胞/懸浮細胞)、凍存細胞、凍存組織、裂解液樣本。


六、樣本需求

細胞樣本:約5×10^6個(可以是2個6cm皿,或以懸浮細胞形式存儲于離心管中,或2個T25瓶);

凍存組織:約40mg;裂解液樣本:蛋白濃度不低于2mg/mg,蛋白總量不低于3mg。


七、樣本準備&運輸

活細胞樣本:距離較近的可提供新鮮樣本,將培養(yǎng)在皿/T25瓶/離心管內的新鮮細胞樣本常溫快遞(最遲次日達)運輸,本市內可閃送或親自遞送,距離較遠的,可-80℃凍存細胞干冰運輸;

組織樣本&裂解液樣本:-80℃凍存干冰運輸。


八、需提供的試劑

檢測用IB抗體和IP抗體


九、實驗周期

1-2周(不包含質譜)


十、其他

后續(xù)檢測Western blot/蛋白質譜

流程圖.png


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